Biozellen®3D 细胞培养基质胶套装

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Biozellen®3D 细胞培养基质胶套装

产品详细

Biozellen®3D 细胞培养基质胶套装
Catalog No.：B-P-00002-2、B-P-00002-4、B-P-00002-10
Specification：2ml-kit、4ml-kit 、10ml-kit
Storage：4℃保存、保存两年
一、产品描述
Biozellen®3D 细胞培养基质胶套装包含整套基质胶、胶体固定液、胶体溶解液，可应用到 3D 细胞培养与微环境应用等；本试剂盒操作便利且可调控基质胶硬度进行多种细胞培养测试；植物胶体可快速形成水凝胶，请操作前详细阅读此使用指南。
（Biozellen®3D 细胞培养基质胶套装为植物来源，无动物成分）
二、应用
•3D 细胞球体培养试验
•小鼠皮下成瘤
•细胞迁移实验
•适合用于 3D 细胞药物筛检平台
•细胞生长和分化
•代谢/毒理学研究
三、样本类型
•肿瘤细胞系、小鼠组织
四、试剂盒组分

		B-P-00002-2、B-P-00002-4、B-P-00002-10 （对应数量和内容）
货号.	Components	Amount	Content
B-P-00002-A	A 基质胶 (2X)	4、8、20	0.5mL / tube
B-P-00002-C	C 缓冲溶液 (10X)	1、2、1	110ml、210ml、1*50 mL / BT
B-P-00002-D	D 缓冲溶液 (10X)	1、2、1	110ml、210ml、1*50 mL / BT

五、3D 细胞球体培养试验步骤：
A、试剂制备
1、A 基质胶：将 A 基质胶溶于 37℃水浴槽回温 10 分钟，确认完全融解.
2、C 缓冲溶液(1X)制备：使用前将 10X C 缓冲溶液用冰的无细胞培养液(例如：无血清 DMEM、opt-MEM)
制备成 1X C 缓冲溶液。(不要用 PBS 稀释 C 缓冲液) .
3、D 缓冲溶液(1X)制备: 使用前用冷的 1x PBS 稀释 10X D 缓冲溶液至 1X D 缓冲溶液.
B、Biozellen®3D 细胞培养基质胶的制备全部步骤需要在无菌环境内操作，操作步骤如下：
1、将 24 孔培养板放置于冰上预冷半小时。
2、细胞计数后取 2×105~2×107 细胞与 0.5 毫升 37℃ 细胞培养基均匀混合，并与 0.5 毫升 37℃ A 胶按照 1:1 等比例均匀混合，最终细胞密度 1*105~1*107cells/mL。注：请选择适当的培养溶液与条件进行试验。
3、取 20-40 微升步骤 2 的混合液滴于步骤 1 预冷的培养板上，胶体将于 5 分钟内成胶。注: 测试胶体是否成胶，可用微量吸管尖温和的触碰胶体表面进行确认。
4、待胶体成胶后，添加 1 毫升冰的 1X C 缓冲溶液，并盖过步骤 3 的胶溶液，固定 15 分钟。
5、待 15 分钟固定后，小心的吸取 C 缓冲溶液并置换为适合此细胞生长之培养基溶液。

6、将含有细胞的胶于 37°C 二氧化碳培养箱内进行 7~14 天的培养，并观察细胞球体的形成，按正常培养基更换频率进行更换操作。
C、溶胶与收集细胞球体准备程序
1、小心的将培养基吸取移除，并用 1X PBS 进行清洗。
2、小心的将 1X PBS 吸取移除，并添加 1 毫升冰的 D 缓冲溶液，盖过胶滴于室温反应 5 分钟。
3、温和的用 1 毫升移液管吸取，直到胶滴完全溶解。
4、将含有细胞球体的溶液吸入 1.5 毫升离心管，用 1000 rpm 的转速离心 10 分钟，移除上清液体并收集细胞球体做分析。
D、收集单颗细胞准备程序
在分离单细胞前，先按上述溶胶与收集细胞球体准备程序进行操作
1、添加 trypsin-EDTA 并与收集的细胞球体于 37°C 混合反应。
2、用 1 毫升移液管混合，直到细胞体完全分解。
3、待细胞球体完全分解，加入 3 倍体积的 1X PBS，并用 1000 转的转速进行离心 10 分钟，并移除上清液体收集沉淀的单细胞做分析。
六、细胞迁移实验准备程序
1、准备 Transwell 装置及无血清 DMEM 细胞培养液 (用于稀释 A 胶)。
2、A 胶 (2X) (货号:B-P-00002-A) 置于 37 ℃水浴槽回温 10 分钟，确认完全融解。
3、用无血清 DMEM 细胞培养液将 A 胶 (2X)稀释 50 倍。
4、根据 Transwell 上室底部面积加入 100-120 ul/cm2 稀释后的 A 胶稀释液到 Transwell 上室中。
5、将步骤 4 在 4 ℃冰箱孵育 30 分钟。
6、将多余的稀释液吸出，并在 Transwell 上室中加入无血清的癌细胞系细胞悬浮液使细胞浓度约 7.5 x 104 cells/well.。
7、在 Transwell 下室中加入含 10 %血清的细胞培养液做为 chemoattractant，吸引癌细胞系进行迁移。
七、小鼠皮下成瘤实验准备
程序 A、细胞房内材料准备、试剂制备及步骤
(1) 材料准备:
1. 冰盒、2. 37 ℃ 水浴槽、3. C 缓冲溶液(10X)、4. 无血清细胞培养液 (例如: 无血清 DMEM，DMEM-F12等，不可用 PBS )、5. A 胶 (2X)、6. 细胞培养液、7. 23-26G 针头、8. 1 mL 针筒、9. 细胞。
(2) 试剂制备:
1、C 缓冲溶液 (0.5 X) 制备 : 使用 37 ℃ 水浴回温的无血清细胞培养液 (例如: 无血清 DMEM 或 DMEM-F12 等，不可用 PBS ) 稀释 C 缓冲溶液 (10 X) 至 C 缓冲溶液 (0.5 X), 即体积稀释 20 倍。使用前放置 37 度水浴槽。(例如:1 mL C 缓冲溶液 (10 X) + 19 ml 无血清 DMEM; 若未使用完毕，可先保存于 4 ℃ 冰箱, 保存一周)
2、A胶 (1X) 制备 : 将 A胶 (2X) (货号:B-P-00002-A) 置于37 ℃ 水浴槽回温10分钟，确认完全溶解。再将 37 ℃ 水浴回温的无血清细胞培养液取 0.5 mL，加至 37 ℃ 已溶解的 0.5 mL A胶 (2X)，配置成 1 mL 的 A胶 (1X)。使用前置于37度，可降低黏度。 (单次使用，勿重复冷冻解冻 A胶 (1X) )
(3)步骤:
1、取细胞溶液离心后收集细胞沉淀，与C缓冲溶液 (0.5 X) 均匀混合使细胞浓度为3*106 cells/mL。
2、A胶 (1X) 与步骤 1 含 C缓冲溶液 (0.5 X) 的细胞系悬浮液，按照 2:1 比例均匀混合配置，细胞悬浮液最终浓度为 106 cells/mL。使用前置于37℃，可降低黏度。 (C缓冲溶液用于A胶凝胶反应，例如0.5ml C 缓冲溶液(0.5 X)含细胞加入 1ml A胶 (1X) 混合成1.5ml 的注射液)
3、选用 23-26 G 的针头 (建议选用 24 G) 及 1 mL 针筒，抽取步骤2 A胶与 C缓冲溶液的细胞混合液至所需注射体积 (例如:0.2-0.6 mL) 。室温37℃至20℃操作抽取。 (若抽取时发生塞针状态，可先把针头拔掉，以针筒进行抽取，建议一次抽取配置好所需针筒数量，避免步骤2 溶液过度凝胶，发生塞针)
4、将抽取好步骤 3 的针筒，带入动物房, 若短时间无法施打建议置于冰上。
B、动物房内材料准备及步骤
(1)材料准备:
1. 含 A胶与 C缓冲溶液的细胞混合液的针筒、2. 皮肤消毒剂 (例如 : 酒精)、
3. 手套、4. 实验小鼠、5. 麻醉小鼠的试剂
(2)步骤:
1、室温下可直接注射。若是置于冰盒上的针筒，回到室温后，待液化再进行注射。含 A胶与 C缓冲溶液的细胞混合液的针筒，以皮下注射方式，注射实验所需的体积至实验鼠 (建议皮下注射量为 0.2 mL，实际状况依需求而定)。(针筒放冰上注射阻力会上升, 放室溫会液化注射阻力小。注射时若因凝胶缘故而阻力变大，需缓慢注射避免针头喷落)
注1 : 注射体积可依不同实验目的做调整，若为皮下血管生成研究注射体积需至少0.5 mL以上。
注2 : 此步骤依实验需求可执行或不执行，若需呈现明显的皮下注射隆起效果，可调整2.试剂制备将C缓冲溶液 (10 X) 稀释15倍，变成C缓冲溶液 (0.66 X)，再执行后续成胶实验；提高C浓度，可提高胶体硬度。 2、培养一至三周后观察量测接种的肿瘤尺寸。
注 3 : 若为血管生成研究，应注射含 VEGF 及 heparin 的 A 胶，以促进血管生成。约三天后，可摘取含有新血管生成的肿瘤组织。
八、案例分享
A、形成 3D 肿瘤球体成功案例分享